Duolink® PLA 結(jié)果為蛋白質(zhì)事件（表達(dá)、相互作用或修飾）提供了相對(duì)定量。因此，加入技術(shù)對(duì)照組，以及在可能的情況下加入生物對(duì)照組，是十分重要的。

技術(shù)對(duì)照：

每個(gè) Duolink® PLA 實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該包含兩個(gè)技術(shù)對(duì)照組。這包括：

1.分別省略一種一抗

用于檢測(cè)每種一抗的非特異性結(jié)合

有助于確定最佳一抗效價(jià)

2.省略所有一抗

用于檢測(cè)系統(tǒng)中 Duolink® PLA 探針的非特異性結(jié)合

生物對(duì)照：

除了技術(shù)對(duì)照外，強(qiáng)烈建議使用生物對(duì)照。陽(yáng)性和陰性生物對(duì)照均可提供有價(jià)值的信息。

1.陽(yáng)性對(duì)照：

用含已知蛋白表達(dá)、相互作用或修飾的單獨(dú)樣本來測(cè)試試劑

可誘導(dǎo)系統(tǒng)（如生長(zhǎng)因子刺激、熱休克等）的使用將提供Duolink® PLA信號(hào)的生物學(xué)相關(guān)性

2.陰性對(duì)照：

使用不表達(dá)蛋白質(zhì)靶標(biāo)的樣品（例如敲除、沉默等）將提供一抗特異性的信息

使用不相關(guān)抗體（例如同種型 IgG、非相互作用蛋白的抗體等）將提供關(guān)于Duolink® PLA 探針特異性的信息

使用阻止蛋白質(zhì)相互作用或修飾的抑制劑將提供 Duolink® PLA 信號(hào)的生物學(xué)相關(guān)性  

優(yōu)化 Duolink® 鄰位連接實(shí)驗(yàn)的補(bǔ)充！

封閉液和抗體稀釋劑：

Duolink®封閉液和抗體稀釋劑含有 Duolink® PLA 探針（PLUS和MINUS）。這些溶液已進(jìn)行優(yōu)化，可與Duolink® PLA試劑配合使用，以最大限度地減少抗體和檢測(cè)寡核苷酸的非特異性結(jié)合。然而，在這些條件下，必須驗(yàn)證您的一抗與目標(biāo)蛋白靶標(biāo)的特異性結(jié)合。應(yīng)通過 Duolink® PLA 單一識(shí)別實(shí)驗(yàn)，或者 IF 或 IHC 來分別檢測(cè)每種一抗。

如果您之前已經(jīng)確定了用于IF 或 IHC 染色的封閉液和/或抗體稀釋劑，則這些溶液很可能也可用于 Duolink® PLA。在這些溶液中不應(yīng)該使用來自與您的一抗相同物種的同種型 IgG 作為封閉液，因?yàn)檫@將導(dǎo)致來自 Duolink® PLA 探針的錯(cuò)誤信號(hào)。