TFIIF是一種由兩個保守亞基組成的通用轉錄因子，可與RNA聚合酶II （RNAPII）緊密結合，調節(jié)真核生物中信使RNA的合成。在此，結合了電子顯微鏡(EM) 和福斯特共振能量轉移的混合方法(FRET) 被描述并用于定位 RNAPII-TFIIF 結構中第二個 TFIIF 亞基 (Tfg2) 的 C 末端。在第一階段，附加到 Tfg2 C 末端的多聚組氨酸標簽用鎳-NTA 納米金進行標記，并設計了七步單粒子 EM 方案以獲得納米金可在 3D 中訪問的區(qū)域，表明 Tfg2 C -末端靠近RNAPII的夾子。接下來，選擇與夾子相鄰的RNAPII的Rpb2和Rpb4亞基的C端放置FRET衛(wèi)星以實現(xiàn)納米定位（NP）分析，從而提高定位精度，使得Tfg2 C發(fā)現(xiàn)-末端駐留在夾脊上，但在轉錄過程中可以移動到夾頂部。因為接受 EM 或 FRET 探針的標簽可以很容易地引入到任何蛋白質亞基，這種混合方法通常適用于補充許多蛋白質復合物的納米精度冷凍電鏡研究。

混合技術利用 Ni-NTA-Nanogold®

闡明亞蛋白結構，
揭示關鍵基因轉錄機制

一種新的混合技術結合了 Ni-NTA-Nanogold® 標記、用于單顆粒分析的創(chuàng)新雙離焦成像與冷凍電鏡以及 FRET——在蛋白質結構繪圖中實現(xiàn)納米級精度。該小組使用這種強大的方法來闡明 DNA 轉錄機制關鍵組件的結構和功能，甚至揭示了這些部分在與 DNA 相互作用以物理啟動轉錄時的運動。